由于傳統(tǒng)定量方法都是終點(diǎn)檢測資源優勢，即PCR到達(dá)平臺期后進(jìn)行檢測方案，而PCR經(jīng)過對數(shù)期擴(kuò)增到達(dá)平臺期時(shí)便利性，檢測重現(xiàn)性極差。同一個(gè)模板在96孔PCR儀上做96次重復(fù)實(shí)驗(yàn)安全鏈，所得結(jié)果有很大差異發展機遇，因此無法直接從終點(diǎn)產(chǎn)物推算出起始模板量可靠保障。加入內(nèi)標(biāo)后影響，可部分消除終產(chǎn)物定量所造成的不準(zhǔn)確性。但即使如此的過程中，傳統(tǒng)的定量方法也都只能算作半定量發展契機、粗略定量的方法。  內(nèi)標(biāo)定量：若在待測樣品中加入已知起始拷貝數(shù)的內(nèi)標(biāo)促進進步，則PCR反應(yīng)變?yōu)殡p重PCR發力，他們之間存在兩種模板之間的干擾和競爭，尤其當(dāng)兩種模板的起始拷貝數(shù)相差比較大時(shí)迎來新的篇章，這種競爭會表現(xiàn)得更為顯著共創美好。但由于待測樣品的起始拷貝數(shù)是未知的推動並實現，所以無法加入合適數(shù)量的已知模板作為內(nèi)標(biāo)，也正是這個(gè)原因覆蓋範圍，傳統(tǒng)定量方法雖然加入內(nèi)標(biāo)優化程度，但仍然只是一種半定量的方法。  外標(biāo)定量：外標(biāo)法不是把標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)加入到被測樣品中又進了一步，而是與被測樣品在相同條件下進(jìn)行檢測多種場景。由于在熒光定量PCR中，Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系規劃，因此可以利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定擴大公共數據，并且在PCR循環(huán)剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期時(shí)，Ct值的重現(xiàn)性極好帶動擴大，即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增核心技術體系，得到的Ct值是恒定的，因此定量的結(jié)果也會準(zhǔn)確很多持續發展。  美國Texas大學(xué)的科研人員進(jìn)行了外標(biāo)法定量和內(nèi)標(biāo)法定量的方法學(xué)比較必然趨勢，得出的結(jié)論是：內(nèi)標(biāo)法作為定量或半定量的手段是不可靠的，而外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法是一種準(zhǔn)確的供給、值得信賴的科學(xué)方法的方法。【Ke LD, Chen Z, Yung WK.A reliability test of standard-based quantitative PCR: exogenous vs endogenous standards. Mol.Cell Probes,2000,14(2):127-135】