實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增曲線包括基線期有望,指數(shù)擴(kuò)增期,線性擴(kuò)增期和擴(kuò)增平臺(tái)期導向作用,標(biāo)準(zhǔn)的曲線應(yīng)該呈典型的S型方案。不規(guī)則曲線可以根據(jù)曲線的具體情況來分析:1)曲線呈斜線上升原因:熱蓋失靈或熱蓋沒蓋緊,導(dǎo)致控溫不準(zhǔn)堅持好、液體揮發(fā)即將展開。解決辦法:更換儀器熱蓋或?qū)嵘w蓋緊。圖1 曲線呈斜線上升2)擴(kuò)增曲線分成兩段(斷裂)圖2擴(kuò)增曲線分成兩段(斷裂)原因:基線的終點(diǎn)大于Ct值特性,通常是因?yàn)槟0錎NA濃度偏高傳承,CT值< 15,而基線仍然取3-15建言直達,其中包含部分?jǐn)U增信號(hào)多種,導(dǎo)致曲線被壓下去。解決方法:減小基線終點(diǎn)充分發揮,至Ct值前4個(gè)循環(huán)發展成就,重新分析數(shù)據(jù)。3)直線擴(kuò)增曲線圖3 某些樣本出現(xiàn)直線擴(kuò)增曲線原因:探針部分降解解決辦法:建議更換試劑進(jìn)行測(cè)試重要方式。4)曲線平臺(tái)期下掉原因:蓋子沒蓋緊解決辦法:PCR反應(yīng)管蓋子蓋上后開展面對面,檢查蓋子是否蓋緊。圖4 曲線平臺(tái)期下掉

